1.2.2 角质形成细胞培养：冻存的角质形成细胞以1 000?5 000细胞/cm2的密度接种于KGM-G0LD培养基中，当细胞达到60%?70%融合时，用0.05%的胰酶和0.02%的EDTA消化传代，前4代细胞用于试验研究。

    1.2.3 复合培养模型的建立：实验分为3组：血清刺激组，DAPT+血清组(简称DAPT组)，无血清组(阴性对照)。将角质形成细胞以1 000?5 000细胞/cm2的密度接种于Transwell细胞培养小室中进行培养，当角质形成细胞100%融合后，提升至气液交界面，下层液体3组分别为：血清刺激组：DMEM高糖+10% FCS； DAPT+血清组：DMEM高糖+DAPT(20umol/L)2h预处理后，再加入10% FCS；阴性对照组：单纯DMEM高糖培养基(无FCS、无DAPT)。在温箱中孵育3d后，待角质形成细胞长成复层并达到终末分化，用D-Hanks液冲洗2遍，可与成纤维细胞开始复合培养，见图1。

    将成纤维细胞以10 000细胞/cm2的密度接种于6孔版，待其100%融合后，将成纤维细胞进行48h无血清培养的饥饿处理 ......